盆筋膜解剖及其与直肠固有筋膜关系研究

目的 探讨盆筋膜的结构、范围及其与直肠固有筋膜的层次关系。方法 2020年12月至2021年3月对由广东药科大学生命与生物制药学院人体解剖与胚胎学系及中山大学中山医学院人体解剖学教研室提供的12具（男性5具、女性7具）骨盆标本进行大体观察，并对Denonvilliers筋膜进行组织学观察。结合2019年12月至2021年3月中山大学附属第三医院胃肠外科收治的20例直肠癌病人（男性10例、女性10例）的盆腔磁共振图像和手术视频进行解剖学印证。结果 12具骨盆大体标本显示，盆筋膜与Gerota筋膜相延续，部分纤维于S4水平构成直肠骶骨筋膜，向下与直肠固有筋膜融合终止于联合纵肌；部分纤维与后方骶前筋膜融合构成肛提肌上筋膜及肌间纤维。Denonvilliers筋膜在盆腔前外侧约2点、10点处与盆筋膜相延续构成完整筒状结构，包绕内层由直肠固有筋膜封套的直肠系膜；除“侧韧带”处有盆腔自主神经直肠支、淋巴管、直肠中动脉相连外，两层筋膜形成完整的双筒状结构，横断面呈同心圆状。除直肠支进入直肠固有筋膜外，盆腔自主神经主要分支均位于盆筋膜内层及Denonvilliers筋膜以外，沿直肠固有筋膜轮廓游离能够避免损伤盆腔自主神经。在7具女性骨盆标本中均能见到菲薄的Denonvilliers筋膜结构。直肠癌病人的横断面磁共振图像能够看到直肠固有筋膜与外侧盆筋膜、Denonvilliers筋膜的轮廓和间隙，手术视频资料也可见到完整盆壁筋膜和Denonvilliers筋膜的轮廓。结论 直肠癌手术中，在盆筋膜、Denonvilliers筋膜与直肠固有筋膜两层结构的间隙进行分离，并保持两层筋膜的完整性，对于保证肿瘤根治性和保护排尿及性功能至关重要。     

新型肝癌组织的体外三维培养模型

目的:利用肝癌组织进行体外的三维（three-dimension，3D）组织块培养，通过添加PD98059和霍乱毒素（cholera toxin，CT）优化培养条件，建立一种高活性的肝癌组织体外培养模型。方法:收集中山大学肿瘤防治中心肝胆科的肝癌组织标本，经清洗、冻存、复苏等处理后分为对照组、PD组、CT组、PD+CT组，同时进行体外的二维（two-dimension，2D）和三维培养。各组组织采用DNA断裂的原位末端标记法（TUNEL）检测组织细胞凋亡情况，qRT-PCR检测BCL-2、BID、Caspase 3、Cyclin D1、CDK2、ELK-1、C-FOS、C-MYC、C-JUN等相关基因的mRNA表达水平，免疫荧光染色检测BCL-2和cleaved caspase-3蛋白表达情况，筛选并确定最优的体外培养方法。结果:3D培养组的组织细胞凋亡均少于2D培养组；PD98059通过上调BCL-2蛋白的表达，下调cleaved caspase-3蛋白的表达，激活MEK/ERK下游基因，从而减少体外培养的组织细胞凋亡，增强其抗凋亡能力；霍乱毒素通过上调Cyclin D1、CDK2的基因表达，促进其增殖。结论:我们开发了一种新型肝癌组织的体外三维培养模型，它可以作为进一步的药物试验和人源性异种移植(PDX)模型的工具。     

姜黄素胶束对Aβ1-42诱导HT22细胞损伤的保护作用

目的通过β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导HT22细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,探讨姜黄素胶束对细胞损伤的保护作用。方法合成姜黄素胶束并评价其体外生物相容性。分别用姜黄素胶束与游离姜黄素预处理细胞后用Aβ_(1-42)诱导HT22细胞损伤,观察对比对照组、模型组、姜黄素胶束组与游离姜黄素组的细胞形态、细胞存活率、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及乳酸脱氢酶(LDH)释放率和三磷酸腺苷(ATP)酶活力。进一步比较HT22细胞对姜黄素胶束和游离姜黄素摄取能力的差异。结果体外溶血实验显示姜黄素胶束的相对溶血率均低于5%,MTT结果显示姜黄素胶束对HT22细胞存活率基本无影响(P>0.05)。与游离姜黄素相比,姜黄素胶束更能显著改善Aβ_(1-42)诱导的HT22细胞损伤的形态,提高细胞存活率,减少ROS生成、抑制MMP降低、降低LDH释放率并升高ATP酶活力(P<0.05)。在相同条件下HT22细胞更易摄取姜黄素胶束。结论与游离姜黄素相比,姜黄素胶束具有更好的生物相容性,同时更能有效对抗Aβ_(1-42)诱导的氧化应激损伤,这可能与姜黄素胶束能促进细胞摄取有关。姜黄素胶束在临床治疗中具有良好的药用前景。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组（60只）和假手术组（15只）。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只;假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分（mNSS）、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组（P＜0.05）,脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义（P＜0.05）,而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平;与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。     

小容量HSH快速抢救失血性休克家兔的效果以及对其心 肝 肾脏功能的影响

目的 观察小容量高渗氯化钠羟乙基淀粉40(HSH)快速抢救失血性休克家兔的效果及其对心、肝、肾等重要脏器的影响.方法 将家兔随机分成失血性克模型对照组、乳酸林格液(RL)组、HSH组.放血于10 min内使平均动脉压降至40 mm Hg(5.33 kPa)维持60 min.随后对照组不补液;RL组按失血跫3倍体积静脉注入RL,60 min内输完;HSH组按失血量10%静脉注入HSH,2 min内输完,再静脉滴注58 min失血量90%的RL维持.测定休克前、休克后、复苏后不同时间点的各项指标.结果 HSH组家兔存活率明显高于RL组和对照组;复苏后较长时间内HSH组家兔血压和左心室舒张末期压力能维持高值,HSH与RL组谷草、谷丙转氨酶水平均优于对照组;HSH在休克后Cr清除速度优于RL及对照组;复苏对血清离子浓度均没有显著影响,降低了红细胞比容,但对红细胞平均体积没有显著影响.结论 小容量HSH快速抢救失血性休克家兔存活率高,能迅速升高血压和左心室舒张末期压力,并且对心、肝、肾等重要器官的功能无明显不良影响.     

辛伐他汀对局部脑缺血大鼠线粒体的抗氧化效应

目的:观察辛伐他汀对局部脑缺血损伤大鼠的神经保护作用及其线粒体机制。方法:实验于2005-03/08在广州医学院生理实验室进行。取72只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、缺血模型组、辛伐他汀组3组,每组24只。辛伐他汀组大鼠灌胃辛伐他汀20mg/kg,1次/d,连续7d,最后一次灌胃1h后缺血模型组和辛伐他汀组大鼠线栓法复制左侧脑缺血2h再灌注模型,正常对照组仅分离动脉,不缺血。观察各组大鼠术后24h神经功能评分(3～18分,评分越高越好)、脑含水量、脑梗死体积以及脑组织线粒体超氧化物歧化酶、丙二醛、NO和Na -K ATPase的改变。结果:经补充后72只大鼠进入结果分析。①神经功能评分:辛伐他汀组明显高于缺血模型组(15.87±0.83,14.25±0.71,P<0.01)。②脑含水量:辛伐他汀组明显低于缺血模型组[(79.56±1.14)%,(81.13±1.36)%,P<0.05]。③脑梗死体积:辛伐他汀组明显低于缺血模型组[(173.7±15.92),(239.94±22.01)mm3,P<0.01]。④脑组织线粒体超氧化物歧化酶和Na -K ATPase活性:辛伐他汀组明显高于缺血模型组(P<0.05)。⑤脑组织线粒体丙二醛和NO含量:辛伐他汀组明显低于缺血模型组(P<0.01)。结论:辛伐他汀可能通过抑制大脑中动脉阻断后引起的脑内线粒体脂质过氧化反应,减少自由基的生成,稳定线粒体功能,增加ATP的生成,从而对缺血脑组织产生保护作用。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA1311C→T复合11内含子93T→C突变

目的　探讨葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)基因cDNA1311C→T复合 11内含子 93T→C的突变与G6PD缺乏的关系。方法　运用硝基四氮唑蓝纸片法筛查G6PD患者 ,以定量法确诊 ,运用PCR SSCP筛查 11外显子异常的标本 ,以突变特异性扩增系统 (ARMS)法鉴定 1311C→T突变 ,DNA直接测序 1311突变标本的 11外显子和 11内含子。结果　在 12例 1311突变的标本中 ,在 11内含子的93位均发现有T→C突变。结论　cDNA1311C→T突变同时合并 11内含子的 93位T→C突变可能是G6PD缺乏患者酶活性降低的原因     

大蒜油对实验小鼠的镇咳祛痰作用

目的探讨大蒜油对小鼠的镇咳祛痰作用。方法以玉米油作为溶剂溶解大蒜油,将大蒜油分高(100mg·kg-1)、中(50mg·kg-1)、低(25mg·kg-1)3种浓度灌胃小鼠后,采用氨水引咳法观察大蒜油镇咳作用,同时取气管进行病理组织学检查,并以氢溴酸右美沙芬糖浆(10mL·kg-1)作阳性对照。采用酚红气管排泌法观察大蒜油祛痰作用,并以盐酸氨溴索口服溶液(4mL·kg-1)作阳性对照。结果大蒜油的镇咳、祛痰作用与溶剂对照组比较有显著的差异性(P<0.05或P<0.01),并存在剂量效应关系;大蒜油还可抑制气管黏膜炎症、充血及黏液分泌,其综合药理作用优于氢溴酸右美沙芬糖浆。结论大蒜油具有显著的镇咳祛痰及黏膜保护作用。     

一例色素失禁症女婴IKBKG／NEMO基因的突变分析

色素失禁症（ IP）是一种罕见的X-连锁显性遗传性皮肤病。其致病基因主要为B细胞编码κ轻链多肽抑制基因（IKBKG）， NF-κB关键调节因子（NEMO）基因。该文综合分析1例IP患儿的临床资料，并提取患儿及其父母的外周血DNA，先用多重聚合酶链反应（ PCR）扩增方法检测频发突变共有序列NEMOΔ4-10缺失，再用跨越断裂点PCR方法扩增NEMO或ΔNEMO基因特异性缺失，并对PCR产物进行序列分析验证。患儿存在NEMO基因外显子4-10的缺失；该突变遗传自其表型正常的母亲。 NEMO 基因外显子4-10的缺失是该患儿的致病性突变。该研究进一步证实了NEMOΔ4-10缺失这种基因组重排是IP患者最常见的突变类型。